Nach dem Fahrtbeginn im nördlichen Stadtteil Handschuhsheim folgt die Heidelberger Straßenbahnlinie 24 der Berliner Straße, um auf der Ernst-Walz-Brücke den Neckar zu überqueren. Mit der Haltestelle Betriebshof wird ein Dreh- und Angelpunkt des Heidelberger Straßenbahnbetriebs erreicht. Nach kurzer Fahrt wird mit dem Heidelberger Hauptbahnhof ein wichtiger Umsteigepunkt im Netz der rnv und auch zum Regional- und Fernverkehr der Deutschen Bahn bedient. Ab dem Römerkreis verläuft die Linie 24 stets in südlich
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